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本试剂盒提供了简单而又超快速地制备15% SDS-PAGE凝胶所需的所有试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制15% SDS-PAGE凝胶。

本试剂盒把SDS-PAGE凝胶配制所需的Tris-HCl、Acr-Bis(29:1)、SDS等预混合成下层胶预混液和上层胶预混液，使用前仅需加入适量10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute即可简单快速地完成下层胶(分离胶)和上层胶(浓缩胶)的配制。

SDS-PAGE凝胶超快速制备试剂盒系列产品有6%、8%、10%、12%和15%共5种常见浓度供您选择，也可以考虑选购可以配制各种不同浓度SDS-PAGE凝胶的SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒(货号：YT048)。

• 两种预混液及TEMED Substitute均需4℃避光保存。凝胶聚合催化剂更宜室温保存，4℃保存时需拧紧瓶盖注意防潮，受潮后会很快失效。凝胶聚合催化剂用水配制成10%溶液后，分装成小管-20℃保存，通常半年内有效，同时应尽量减少室温存放时间，以防失效。推荐凝胶聚合催化剂每次均少量配制，并尽量使用较新鲜配制的10%凝胶聚合催化剂溶液。
  
• 下层胶预混液和上层胶预混液中含有Acr-Bis，对人体有毒，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
  
• TEMED Substitute易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
  
• TEMED Substitute易燃，有腐蚀性，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。

• 根据目的蛋白的分子量大小选择合适浓度的SDS-PAGE下层胶(即分离胶)。
  不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围如下：
  

  SDS-PAGE分离胶浓度	最佳分离范围
  6%胶	50～150kD
  8%胶	30～90kD
  10%胶	20～80kD
  12%胶	12～60kD
  15%胶	10～40kD

• 称取适量凝胶聚合催化剂，用双蒸水或其它高纯度的水配制10%凝胶聚合催化剂溶液。例如称取0.1g凝胶聚合催化剂，用高纯度水溶解并定容到1mL即为10%凝胶聚合催化剂溶液。凝胶聚合催化剂溶液容易失效，具体请参考注意事项中相关说明。
  
• 参考下表，在15% SDS-PAGE下层胶预混液中，按照1%的比例加入相应量的10%凝胶聚合催化剂溶液，按照0.04%的比例加入相应量的TEMED Substitute。例如10mL 15%SDS-PAGE下层胶预混液中，加入100μL 10%凝胶聚合催化剂溶液和4μL TEMED Substitute。适当混匀后倒入到制胶模具中，用异丙醇、0.1% SDS或蒸馏水封住液面，直至下层胶凝固充分。通常10～30分钟内胶会凝固。
  
  • 具体的凝固时间和温度及光照有关，说明书中10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的正常推荐用量是室温为25℃时的推荐用量。为达到与25℃时相近的凝固时间，当室温低于25℃时，可以适当同时加大10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量，例如20℃时建议用量是正常推荐用量的1.5倍，15℃时建议用量是正常推荐用量的2倍。

  成分	配制不同体积SDS-PAGE下层胶所需各成分的体积(mL)
  15% SDS-PAGE下层胶预混液	5	10	15	20	30	50
  10%凝胶聚合催化剂	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
  TEMED Substitute	0.002	0.004	0.006	0.008	0.012	0.02

• 参考下表，在下层胶凝固后，在SDS-PAGE上层胶预混液中，按照1%的比例加入相应量的10%凝胶聚合催化剂溶液，按照0.1%的比例加入相应量的TEMED Substitute。例如10mL SDS-PAGE上层胶预混液中，加入100μL 10%凝胶聚合催化剂溶液和10μL TEMED Substitute，适当混匀。去除下层胶上面覆盖的液体，尽量去干净，然后倒入添加了10%凝胶聚合催化剂溶液和TEMED Substitute的SDS-PAGE上层胶预混液，插入梳子待凝固。上层胶凝固后，则表明制胶步骤结束，可以准备进行后续的电泳了。
  

  成分	配制不同体积SDS-PAGE上层胶所需各成分的体积(mL)
  SDS-PAGE上层胶预混液	2	3	4	6	8	10
  10%凝胶聚合催化剂	0.02	0.03	0.04	0.06	0.08	0.1
  TEMED Substitute	0.002	0.003	0.004	0.006	0.008	0.01

• 配制好的凝胶如果当天不能使用，可以在4℃保存1～2天后使用。